Centro de Biotecnologia - UFRGS

Espectrometria de massas

A espectrometria de massas (mass spectrometry) é uma poderosa ferramenta física que caracteriza as moléculas pela medida da relação massa/carga de seus íons. Ela foi usada, inicialmente, na determinação de massas atômicas e, vem sendo empregada na busca de informações sobre a estrutura de compostos orgânicos, na análise de misturas orgânicas complexas, na análise elementar e na determinação da composição isotópica dos elementos. A espectrometria de massas acoplada (MS/MS) é uma técnica analítica poderosa, usada para identificar compostos desconhecidos, quantificar compostos conhecidos e auxiliar na elucidação estrutural de moléculas. A MS/MS apresenta uma vasta gama de aplicações, como por exemplo: na ecologia, toxicologia, geologia, biotecnologia, e descoberta e desenvolvimento de fármacos.

Apenas no início da década de 80, a espectrometria de massas começou a ser mais aplicada em determinações de massas moleculares de proteínas. Com o desenvolvimento de equipamentos cada vez mais especializados, a espectrometria de massas tornou-se uma ferramenta revolucionária na química de proteínas moderna. O método mais clássico de identificação de proteínas por espectrometria de massas é denominado PMF: peptide mass fingerprinting. Esta metodologia é baseada na digestão da proteína a ser identificada por uma enzima proteolítica (por exemplo, a tripsina) produzindo peptídeos. As massas desses peptídeos são então determinadas com grande acuidade (0,1-0,5 Da). As massas obtidas formam uma espécie de impressão digital (peptide mass fingerprinting) da proteína. Softwares especiais permitem comparar o PMF da proteína que queremos identificar com os gerados teoricamente para todas as seqüências de proteínas presentes nos bancos de dados. A espectrometria de massas também pode ser usada para seqüenciar pequenas regiões de peptídeos (por MS/MS). O uso das pequenas seqüências obtidas em conjunto com as informações de massas moleculares constitui uma poderosa técnica de identificação de proteínas.